Elektrofores historia

Kapillär elektrokromatografi CEC-packad kolonn används i undantag för ledande vätska. Den mobila vätskan passerar över kolonnen tillsammans med separationen av blandningen. Kapillär isoelektrisk fokusering (CIEF) används främst för att separera de joniska komponenterna i Zwitter, såsom peptider och proteiner, som innehåller både positiva och negativa tiotusen steg. En ledande vätska med en pH-gradient används för att separera proteinlösningen.

Varje protein migrerar till regionen med sin isoelektriska punkt i pH. vid den isoelektriska punkten blir nettobelastningen av proteiner noll. Varje komponent migrerar historia successiva zoner, och mängden komponent erhålls genom att mäta migrationens längd. Hur kapillär elektrofores fungerar vanligtvis i laddade arter för att flytta på elektriska områden. Laddning, viskositet och molekylradie är de tre faktorer som bestämmer den elektroforetiska rörligheten elektrofores en molekyl i ett elektriskt fält.

Laddningsjoner och positivt laddade molekyler rör sig mot den katodnegativa elektroden, medan ANIE negativt laddade molekyler rör sig mot den anodpositiva elektroden. Viskositet-mediets viskositet är rörelsen av motsatta molekyler, och den är konstant för ett visst separationsmedium. Om två molekyler av samma storlek utsätts för elektrofores kommer molekylen med högre laddning att röra sig snabbare.

Graden av migration av laddade arter ökar med ökande styrka av det elektriska fältet. Mekanismen för kapillär elektrofores visas i Figur 2. Historia 2: kapillärelektrofores Elektroosmotiskt flöde EAV det elektroosmotiska flödet genererar den mobila fasen av kapillärelektrofores. I de flesta fall är kapillärmaterialet kiseldioxid. Kisel hydrolyseras, vilket ger negativt laddade siomoner när elektrofores passerar genom kapillärröret.

Därefter bär kapillärväggen negativt laddade lager. Lösningens katjoner lockas till dessa negativa laddningar och bildar en dubbel nivå av katjoner på de negativa laddningarna. Det inre kationiska skiktet är stabilt, medan det yttre kationiska skiktet rör sig mot katoden som ett volymetriskt flöde av laddade molekyler. Källan till injektionsflaskan, injektionsflaskan och kapillären vid destinationen fylls med en elektrolyt såsom en vattenhaltig buffertlösning.

För att sätta in ett prov placeras ett kapillärinlopp i en injektionsflaska historia innehåller provet. Provet injiceras i kapillären genom kapillärverkan, tryck, sifonering eller elektrokinetiskt, och sedan återförs kapillären till den ursprungliga flaskan. Migrationen av analyter initieras av ett elektriskt fält, som appliceras mellan de initiala och tilldelade flaskorna och levereras till elektroderna av en högspänningsströmkälla.

I det vanligaste CE-läget dras elektrofores Ijoner, positiva eller negativa, genom kapillären i samma riktning med hjälp av ett elektroosmotiskt flöde. Analyterna separeras när de migrerar på grund av sin elektroforetiska rörlighet och finns nära kapillärutloppet. Detektorutgången är Sen till datautmatningsenheten och en åtgärd som en integrator eller dator.

Data visas sedan som ett elektroferogram, som rapporterar detektorns svar som en funktion av tiden. De separerade kemiska föreningarna framträder som toppar med olika migrationstider i elektroferogrammet.

Jorgensen och Krinn Dirman Lukacs, som demonstrerade förmågan hos elektrofores teknik för första gången. Smith och kollegor, och ger extremt hög känslighet för att analysera mycket små provstorlekar. Trots det faktum att mycket små provstorlekar, som regel, endast några nanoliter vätska injiceras i kapillären, uppnås hög känslighet och skarpa toppar delvis på grund av injektioner som leder till screening av historia i smala Detta uppnås i eher PRESURE eller elektrokinetiska injektioner genom att helt enkelt suspendera provet i en buffert med en lägre ledningsförmåga e.

För att uppnå större genomströmning används kapillärmatrisinstrument för att analysera många prover samtidigt. Sådana CAE-kapillärmatrisinstrument med 16 eller 96 kapillärer används för att sekvensera kapillär-DNA med medelhög till hög genomströmning, och kapillärernas ingångsändar har avgörande rumslig för sbsaplös acceptans. Vissa aspekter av verktygen, såsom detektion, är mer komplexa än för ett enda kapillärsystem, men de grundläggande principerna för design och drift liknar dem som visas i Figur 1.

Detektion [redigera] separation med hjälp av kapillär element detektionselement. I dessa system används en del av kapillären själv som en detektionscell.Genom att använda detektion i röret kan man upptäcka separerade analyter utan förlust av upplösning. I allmänhet är kapillärer som används vid kapillärelektrofores belagda med en polymer, ofta polyimid eller Teflon, för att öka flexibiliteten.

Den del av kapillären som används för att detektera ultraviolett ljus måste emellertid vara optiskt transparent. För kapillärer belagda med polyimid bränns eller skrapas beläggningssegmentet vanligtvis för att ge historia naket fönster flera millimeter långt. Denna nakna del av kapillären kan lätt bryta, och kapillärer med transparenta beläggningar är tillgängliga för att förbättra cellfönstrets stabilitet.

Detektionsbanans längd vid kapillärelektrofores ~ 50 mikrometer är mycket mindre än elektrofores traditionella UV-celler ~ 1 cm.